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技術(shù)文章
科普一下什么是嘌呤霉素
   嘌呤霉素(puromycin;PM ) 是一種蛋白質(zhì)合成抑制劑,它具有與tRNA分子末端類似的結(jié)構(gòu),能夠同氨基酸結(jié)合,代替氨?;膖RNA同核糖體的A位點結(jié)合,并摻入到生長的肽鏈中。雖然嘌呤霉素能夠同A位點結(jié)合,但是不能參與隨后的任何反應(yīng), 因而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成的終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。

  可由白色鏈球菌(Streptomyces.alboniger)發(fā)酵制得的抗生素。熔點175.5~177.0℃。旋光度-11 (乙醇)。在酸性溶液中分解成為6-二嘌呤,O-甲基-L-酷氨酸及3-氨基-3-去氧核糖。結(jié)構(gòu)與氨基酰tRNA分子中腺苷相連結(jié)的氨基酸末端基因相似,因而它可作氨基酰tRNA的類似物,從而取代一些氨基酰tRNA進(jìn)入核糖體的A位與正在延伸的多肽鏈結(jié)合,當(dāng)延長中的肽轉(zhuǎn)入此異常A位時,容易脫落,以肽基嘌呤霉素的形式從核糖核蛋白體上早期解離,終止肽鏈合成,從而抑制了蛋白質(zhì)的合成。由于嘌呤霉素對原核和真核生物的翻譯過程均有干擾作用,故難于用做抗菌藥物,主要用作研究蛋白質(zhì)合成的生物化學(xué)工具。有人試用于腫瘤治療。

  嘌呤霉素在分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)中常作為穩(wěn)定細(xì)胞系篩選用試劑。在使用帶有PuroR篩選標(biāo)記的載體DNA轉(zhuǎn)染動植物細(xì)胞時,向動植物細(xì)胞培養(yǎng)基加入嘌呤霉素可以殺死沒有被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,篩選出陽性轉(zhuǎn)染細(xì)胞,建立穩(wěn)定細(xì)胞系。嘌呤霉素可以在較低濃度水平起作用,作用快,在不到1周的時間內(nèi)篩選出穩(wěn)定細(xì)胞系。

  嘌呤霉素配制方法:

  先將使用到的所有器具去除內(nèi)毒素和其它污染源,儀器表面、工作臺面消毒。

  在分析天平上稱取嘌呤霉素粉末0.050 g,加10 mL 無菌HEPES溶液溶解。

  用的超濾濾膜過濾到去除內(nèi)毒素的容器中,然后分裝到 1.5 mL EP管中。

  不建議使用螺旋蓋管子,容易污染。-20度保存。

  為避免污染和失效,建議分裝成小規(guī)格的,如100 uL。

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