SuperSignal ECL Chemiluminescent Substrate Kit

超敏型ECL化學(xué)發(fā)光顯色試劑盒

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

超敏型ECL化學(xué)發(fā)光顯色試劑盒（SuperSignal ECL Chemiluminescent Substrate Kit）是靈敏的、基于魯米諾的新一代增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光HRP底物，通過(guò)Western Blot能實(shí)現(xiàn)低皮克級(jí)的蛋白檢測(cè)。

超敏型ECL化學(xué)發(fā)光顯色試劑盒特別設(shè)計(jì)專為使用HRP偶聯(lián)的Western Blot實(shí)驗(yàn)提供*的信號(hào)和低皮克靈敏度。其發(fā)光強(qiáng)度和好的的信號(hào)持續(xù)允許多次曝光，更容易收集到發(fā)文質(zhì)量的印記圖像。本品能兼容各種印跡膜、封閉液和大量的抗體稀釋液，能夠滿足絕大部分的Western blot應(yīng)用需求。

超敏型ECL化學(xué)發(fā)光顯色試劑盒的檢測(cè)靈敏度和使用方法類似于Thermo Scientific™的SuperSignal™ West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate，具有以下*的特征：

• 低皮克級(jí)靈敏度：檢測(cè)NC膜或PVDF膜上低皮克級(jí)的蛋白條帶；

• 長(zhǎng)信號(hào)持續(xù)時(shí)間：在優(yōu)化條件下，經(jīng)底物孵育的印跡條帶能持續(xù)輸出6~8h的可檢測(cè)光信號(hào)；

• 試劑穩(wěn)定性高：工作液在8h內(nèi)穩(wěn)定，試劑盒在4℃可穩(wěn)定放置1年；

• 經(jīng)濟(jì)實(shí)惠：對(duì)稀釋抗體濃度進(jìn)行優(yōu)化

﹒0.2~1.0µg/ml一抗（從1µg/ml儲(chǔ)存液稀釋1:1,000~1:5,000倍）

﹒10~50ng/ml二抗（從1µg/ml儲(chǔ)存液稀釋1:20,000~1:100,000倍）

產(chǎn)品組成

注意事項(xiàng)

1） 為獲得醉加實(shí)驗(yàn)效果，應(yīng)注意優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，包括樣品用量、凝膠類型、轉(zhuǎn)膜方法、膜的類型、封閉液、洗滌液、一抗/二抗稀釋度以及孵育時(shí)間等。

2） 洗滌液、封閉液、抗體稀釋液、SuperSignal ECL工作液應(yīng)足量使用，確保印跡膜處于濕潤(rùn)狀態(tài)。

3） 為獲得醉加實(shí)驗(yàn)效果，孵育過(guò)程中使用搖動(dòng)或擺動(dòng)工作臺(tái)。

4） 緩沖液中避免使用疊氮鈉作為防腐劑，因其會(huì)抑制HRP活性。

5） 使用親和素/系統(tǒng)時(shí)，應(yīng)避免使用脫脂奶粉的封閉液。

6） SuperSignal ECL A液和B液在吸取過(guò)程中必須要更換槍頭，上述試劑相互污染后會(huì)導(dǎo)致SuperSignal ECL A液和B液逐漸失效，影響后續(xù)的使用效果。

7） SuperSignal ECL A液和B液使用后，請(qǐng)蓋緊瓶蓋以防失效， 特別是B液含有氧化劑，比較容易被還原而失效。

8） SuperSignal ECL熒光持續(xù)時(shí)間很長(zhǎng)，但開(kāi)始反應(yīng)后的30min內(nèi)熒光更強(qiáng)一些，隨后熒光會(huì)逐漸減弱，因此請(qǐng)注意充分利用這熒光較強(qiáng)的30min進(jìn)行曝光或成像儀檢測(cè)。

9） SuperSignal ECL工作液室溫能穩(wěn)定保存8h，暴露在陽(yáng)光或其他強(qiáng)光下都會(huì)破壞工作液。短期暴露在實(shí)驗(yàn)室光線下不會(huì)破壞工作液。

10） SuperSignal ECL A液和B液均對(duì)人體有害，操作時(shí)請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

需要自行準(zhǔn)備材料

• Western Blot印跡膜：用合適方法電泳分離蛋白，并將這些蛋白轉(zhuǎn)移到所需的印跡膜上。

• X光片或成像儀

• 旋轉(zhuǎn)或搖擺平臺(tái)振蕩器：孵育過(guò)程中用于膜的搖動(dòng)。

• 稀釋液、洗滌液、封閉液

• 一抗、HRP標(biāo)記的二抗

• 用于X光片曝光用的暗盒、顯影和定影液

Western Blot操作步驟

【注意】：為獲得醉加實(shí)驗(yàn)效果，應(yīng)注意優(yōu)化整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的組分和步驟。

1） 將印跡膜從蛋白轉(zhuǎn)印儀中取出，加入合適的封閉液在室溫下孵育20~60min，保持振蕩，以封閉膜上非特異性蛋白結(jié)合位點(diǎn)。對(duì)于一些背景較高的抗體，可以在4℃封閉過(guò)夜。

2） 將印跡膜從封閉液中取出，加入一抗工作液中室溫或4℃孵育1h，保持振蕩。如果一抗孵育1h效果不佳，可在4℃孵育過(guò)夜，保持震蕩?；蚋鶕?jù)一抗說(shuō)明選擇適當(dāng)?shù)姆跤郎囟群蜁r(shí)間。

3） 將足量的洗滌液加入膜上，保證*覆蓋膜。振蕩孵育≥5min，更換洗滌液并重復(fù)該步4~6次。增加洗滌液體積、洗滌次數(shù)和洗滌時(shí)間有助于降低背景信號(hào)。

4） 將印跡膜加入HRP標(biāo)記的二抗工作液中，室溫孵育1h，保持振蕩?；蚋鶕?jù)二抗說(shuō)明選擇適當(dāng)?shù)姆跤郎囟群蜁r(shí)間。

5） 重復(fù)步驟3），充分洗滌以去除未結(jié)合的HRP標(biāo)記二抗。

6） 用鑷子將膜輕輕取出，用吸水紙略吸去過(guò)多的液體（勿接觸膜的蛋白面），然后置于一潔凈保鮮膜或恰當(dāng)容器上。

7） 配制SuperSignal ECL工作液：根據(jù)需要量，取A液和B液等體積混合即為SuperSignal ECL工作液，室溫放置備用，工作液宜在臨檢前配制。

8） 根據(jù)膜的大小，按每10cm²膜加1ml SuperSignal ECL工作液的比例，滴加SuperSignal ECL工作液到膜上，確保工作液均勻覆蓋在膜上，孵育5min。

9） 從工作液中取膜，棄SuperSignal ECL工作液，用吸水紙略吸去過(guò)多的液體。將膜放在兩片保鮮膜中間（避免膜與膜之間產(chǎn)生氣泡），隨后進(jìn)行壓片檢測(cè)或成像儀檢測(cè)。

① 壓片檢測(cè)：a）將膜固定于膠片暗盒片夾內(nèi)，蛋白面朝上，除適用于膠片曝光用的燈（如紅燈）之外，關(guān)閉所有的燈。b）將X光片置于膜的上面，建議一次曝光1min，立即顯影定影，根據(jù)結(jié)果再調(diào)整曝光時(shí)間，或直接分別曝光1，3，5min，然后一起顯影定影觀察結(jié)果。化學(xué)發(fā)光反應(yīng)在底物孵育后的前5-30min是醉強(qiáng)烈的，這一反應(yīng)可持續(xù)幾個(gè)小時(shí)，但強(qiáng)度會(huì)隨時(shí)間下降，如有底物孵育后較長(zhǎng)時(shí)間才曝光，曝光時(shí)間可能需要延長(zhǎng)以獲得較強(qiáng)信號(hào)。

11） 采用熒光成像儀檢測(cè)：將膜放置到熒光成像儀內(nèi)，參考儀器說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠(chéng)為信、合同守信"的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

超敏型ECL化學(xué)發(fā)光顯色試劑盒免疫學(xué)分析

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