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產(chǎn)品中心
LysoSensor 黃/藍色溶酶體熒光探針

LysoSensor 黃/藍色溶酶體熒光探針

簡要描述:

LysoSensor 黃/藍色溶酶體熒光探針 為滿足研究者研究活細胞內(nèi)溶酶體生成和功能的動力學特征,特此開發(fā)Lysosensor探針,一種區(qū)分酸性細胞器的熒光pH指示劑。該系列染料屬于向酸性探針,由于質(zhì)子化聚集在酸性細胞器上。這一質(zhì)子化也使得因弱堿性側鏈而封閉熒光的探針得以熒光釋放,促使熒光信號增強。

產(chǎn)品時間:2024-03-21

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 LysoSensor Yellow/Blue DND-160 /藍色溶酶體熒光探針      

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號

規(guī)格

價格(元)

LysoSensor Yellow/Blue DND-160

MX4316-50UL

50µl

583

產(chǎn)品描述

為滿足研究者研究活細胞內(nèi)溶酶體生成和功能的動力學特征,特此開發(fā)Lysosensor探針,一種區(qū)分酸性細胞器的熒光pH指示劑。該系列染料屬于向酸性探針,由于質(zhì)子化聚集在酸性細胞器上。這一質(zhì)子化使得因弱堿性側鏈而封閉熒光的探針得以熒光釋放,促使熒光信號增強。因此,LysoSensor探針遇酸后熒光信號呈現(xiàn)pH依賴性的增強。

LysoSensor Yellow/Blue DND-160(黃/藍色溶酶體探針)是一種獨*-特的比率型探針,呈現(xiàn)pH依賴性的雙激發(fā)和雙發(fā)射光譜峰(見Fig 1)。然而,活細胞中這一探針僅呈現(xiàn)pH依賴的雙發(fā)射光譜(發(fā)射波長比率~450/510 nm,激發(fā)波長~365 nm)。在酸性細胞器中,LysoSensor Yellow/Blue DND-160主要呈現(xiàn)黃色熒光,而在酸性偏低的細胞器中具有藍色熒光。雙發(fā)射波長的測定允許比率成像分析在酸性細胞器比如:溶酶體或精子頂體內(nèi)的pH。其pKa值約為4.2。LysoSensor Yellow/Blue DND-160,常常簡寫成PDMPO,普遍用作海洋硅藻中二氧化硅沉積和運輸?shù)囊环N示蹤劑。

image.png

Fig 1. LysoSensor Yellow/Blue DND-160pH依賴性光譜反應圖(A)熒光激發(fā)光譜(B)熒光發(fā)射光譜。

本品為DMSO儲存液,濃度為1mM。用于活細胞的溶酶體染色,建議工作濃度為1µM,需根據(jù)實際情況做優(yōu)化調(diào)整。

產(chǎn)品特征

1) 外觀:溶液

2) 濃度:1mM in DMSO

3) 亞細胞定位:溶酶體

4) 顏色:黃色、藍色

5) 檢測儀器:熒光顯微鏡

6) Absnm329384nm [雙吸收波長,對pH敏感,見Fig 1]

7) Emnm):440540nm [雙發(fā)射波長,對pH敏感,見Fig 1]


保存與運輸方法

保存:-20oC避光干燥保存,收到貨至少12個月有效。

運輸:冰袋運輸。

注意事項

1) 整個染色過程中需注意避光。

2) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

使用前,先將本品取出回溫至室溫,并對其進行簡單低速離心使溶液降至管底。第一次使用請將本品按單次用量分裝保存,-20°C避光干燥保存,盡量避免反復凍融。工作濃度需根據(jù)不同的實驗要求、細胞類型、細胞或組織的膜通透性等進行優(yōu)化。

1. 工作液的配制
利用生長培養(yǎng)基或合適的緩沖液將 1mM 儲存液稀釋至工作濃度,工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用。對于 Lysosensor系列溶酶體探針,推薦工作液濃度1µM
【注意】:

1)為了降低探針加載過度可能引起的假陽性,建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

2)若細胞在染色后于不含染料的培養(yǎng)基中孵育,會觀察到熒光信號的衰減和細胞的空泡化現(xiàn)象。

2. 染色步驟(貼壁細胞)
1)將細胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上,加入合適培養(yǎng)基,使其爬片生長。
2)待細胞生長到合適密度,吸除培養(yǎng)液,加入適量 37℃預熱的含探針培養(yǎng)基(必須完*-全覆蓋住細胞),在適合特定細胞類型的生長條件下孵育細胞30min-2h(具體孵育時間需根據(jù)細胞類型而定)。
3)利用不含探針的新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液,并且用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進行觀察。若染色不夠充分,建議增加染料濃度或延長染色時間,使得染料能聚集在溶酶體上。

3. 染色步驟(懸浮細胞)
1)離心沉淀細胞,吸除上清。
2)利用適量 37℃預熱的含探針培養(yǎng)基重懸細胞,在適合特定細胞類型的生長條件下孵育細胞30min-2h(具體孵育時間需根據(jù)細胞類型而定)。
3)離心,吸除染色液,加入新鮮培養(yǎng)基重懸細胞。
4用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進行觀察。若染色不夠充分,建議增加染料濃度或延長染色時間,使得染料能聚集在溶酶體上。
注意】:

另一種方法,懸浮細胞可能會粘附到經(jīng) BD Cell-Tak 處理的蓋玻片上,此時,可用類似于貼壁細胞的方法進行染色


附錄I 溶酶體探針總表

貨號

名稱

Abs (nm)[1]

Em(nm)[1]

pKa

MX4320-50UL

LysoTracker Blue DND-22 藍色

373

422

N/A

MX4318-50UL

LysoTracker Green DND-26 綠色

504

511

N/A

MX4317-50UL

LysoTracker Red DND-99 紅色

577

590

N/A

MX4319-50UL

LysoTracker Deep Red 遠紅

647

668

N/A

MX4316-50UL

LysoSensor Yellow/Blue DND-160 /藍色

329,384[2]

440540[2]

4.2

MX4321-50UL

LysoSensor Green DND-189 綠色

443

505

5.2

[1]:在水溶性緩沖液或甲醇中測定的吸收和發(fā)射波長;在細胞環(huán)境內(nèi)數(shù)值可能會有些許差異。

[2]:雙吸收和發(fā)射波長,對pH敏感。

溶酶體系列探針常見問題

1. 如何選擇合適的溶酶體探針?

答:對于溶酶體定位實驗,請選擇Lysotracker系列探針,根據(jù)自身的實驗體系,結合lysotracker系列探針的熒光特征,選擇合適激發(fā)和發(fā)射波長的熒光探針。Lysotracker Blue DND-22MX4320-50UL)探針的光量子產(chǎn)率偏低,建議在非熒光選擇受限的情況下,推薦選擇其他幾款Lysotracker探針。對于酸性細胞器(比如溶酶體)的pH測定實驗,請選擇Lysosensor系列探針。

2. 溶酶體探針染色后是否能做固定?

3. 溶酶體探針是否能用于流式分析和熒光光度計分析?

4. 溶酶體探針LysoTracker Green DND-26MX4318-50UL LysoSensor Yellow/Blue DND-160

MX4316-50UL)的建議孵育時間多少?

 

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